解剖学报杂志

解剖学报杂志2021年第1期

• 别孕烯醇酮对6-羟基多巴胺损伤的细胞系SH-SY5Y的保护作用

  王彤彤,叶鑫,边维,陈治池,杜娟娟,傅维达,陈梦娇,李俊楠,孙臣友

  目的： 明确别孕烯醇酮（APα）对6-羟多巴胺（6-OHDA）损伤的SH-SY5Y细胞系的保护作用，并阐明可能的分子机制。方法： 向体外培养的SH-SY5Y细胞系中分别加入6-OHDA、APα、γ-氨基丁酸A受体（GABAAR）拮抗剂荷包牡丹碱（Bic）和电压门控L型Ca2+通道拮抗剂硝苯地平（nifedipine），采用免疫荧光细胞化学染色方法观察不同组别酪氨酸羟化酶（TH）阳性细胞的变化，Western blotting检测胞质钙调蛋白（CaM）、钙离子钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ δ3（CaMKⅡδ3），胞核CaMKⅡδ3、脑源性神经营养因子（BDNF）和细胞周期蛋白依赖性激酶（CDK1）表达的变化，采用蛋白质免疫共沉淀验证CaMKⅡδ3与CDK1/BDNF的相互作用。： 结果： APα作用后，6-OHDA损伤的SH-SY5Y细胞TH和5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）阳性细胞数目均明显增加，而TH/BrdU双阳性细胞数目无显著变化；同时Western blotting结果表明，SH-SY5Y细胞胞质和胞核上述蛋白的表达与单纯 6-OHDA 组相比也明显上升，经Bic处理后各蛋白增加更为明显。免疫共沉淀结果表明，CaMKⅡδ3与CDK1/BDNF存在相互作用。： 结论： APα对6-OHDA损伤的SH-SY5Y细胞的保护中，GABAAR发挥负性调控作用，通过稳定细胞的内环境达到增加TH阳性神经元数量的目的，其中Ca2+ -CaM-CaMKⅡδ3信号通路和BDNF与CDK1发挥了关键作用。

• 苯丙胺通过抑制蛋白激酶B/糖原合成酶激酶3β/脑衰蛋白反应介导蛋白2信号通路损伤多巴胺神经细胞

  任亚丽,郭磊,潘三强

  目的 探讨苯丙胺损伤多巴胺神经细胞的信号通路机制。： 方法 通过腹腔注射苯丙胺建立小鼠多巴胺细胞损伤模型，将小鼠随机分为正常组、生理盐水组、苯丙胺1 d组、7 d组、14 d组和28 d组，每组10只。在PC12细胞中加入苯丙胺建立细胞损伤模型。通过免疫组织化学和免疫荧光技术观察小鼠纹状体多巴胺神经纤维和PC12细胞的变化，通过免疫印迹法检测纹状体和PC12细胞蛋白激酶B（Akt）/糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)/脑衰蛋白反应介导蛋白2(CRMP-2)通路蛋白的变化。： 结果 苯丙胺损伤小鼠纹状体多巴胺神经纤维和PC12细胞的突起，并引起磷酸化Akt（p-Akt）和磷酸化GSK-3β（p-GSK-3β）表达减少，磷酸化CRMP-2（p-CRMP-2）表达增多。给予Akt上游的激活剂神经生长因子和GSK-3β的抑制剂SB216763，则增加p-Akt和p-GSK-3β的表达，抑制p-CRMP-2的表达，并且对PC12细胞的突起有保护作用。： 结论 抑制Akt/GSK-3β/CRMP-2信号通路是苯丙胺损伤多巴胺神经细胞的机制之一。

• 雌激素受体α和β表达变化与C57BL/6 J小鼠母婴分离所致焦虑样行为相关

  何凤琴,郁兵,向全丽,周登祥,屈庚超

  目的探讨母婴分离对母亲焦虑样行为的影响以及与雌激素受体α（ERα）和β（ERβ）相关的机制。： 方法将30只C57BL/6 J母鼠分为对照组（CG，10只，不分离组）、短暂分离组（SG，10只，从分娩第2天～第10天母婴每天分离15 min）及长期分离组（LG，10只，从分娩第2天～第10天，母婴每天分离3 h）。通过旷场实验（OF）和高架十字实验（EPM）检测动物是否有焦虑样行为；通过免疫组织化学方法检测中脑区内侧视前区（mPOA）、下丘脑腹内侧核（VMH）和杏仁内侧核（MeA）ERα和ERβ免疫反应神经元（ERα-IRs和ERβ-IRs）的变化。： 结果在OF中，LG组与CG组和SG组相比在旷场中心活动时间、穿格次数和总距离减少具有极显著性意义（P<0.001），SG组与CG组差异没有显著性（P&gt;0.05）。在EPM中，LG组在开臂中活动时间占总时间百分比和运动距离极明显少于CG组和SG组（P<0.001），运动的总距离也比CG组和SG组明显减少（P<0.001）。免疫组织化学实验结果显示，LG组在mPOA、VMH和MeA 3个区域中ERα-IRs和ERβ-IRs明显低于CG组和SG组（P<0.001）。： 结论母婴长期分离可能使母鼠产生焦虑样行为，而这一行为的产生可能与脑区ERα和ERβ显著减少有关。

• 银杏叶提取物对青春期乏运动大鼠行为学的影响

  程晶,游剑虹,陈琳琳,李振喜

  目的： 探讨银杏叶提取物对青春期乏运动大鼠行为学的影响及其可能机制。： 方法将24只4周龄SD雄鼠随机分为正常对照组(NC）、乏运动组（AS）以及银杏叶提取物处理组（GBE），干预性饲养至8周龄，进行旷场实验及高架十字迷宫实验检测行为学改变。比色法检测脑组织匀浆丙二醛（MDA）含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性。Western blotting 检测脑实质糖原合成激酶3β(GSK-3β)和 β-连环蛋白(β-catenin)蛋白表达水平。： 结果旷场实验显示，AS组大鼠自主活动增加，而在旷场中央区域停留时间及次数减少；高架十字迷宫实验显示，AS组大鼠进入开臂时间及次数均减少。GBE干预有效逆转AS诱导的焦虑样行为（P＜0.05）。与NC组相比，AS组GSK-3β 和β-catenin比值上调，MDA含量增加，SOD活性降低；而GBE组GSK-3β和β-catenin比值明显下调，MDA含量下降，SOD活性增加（P＜0.05）。： 结论银杏叶提取物对青春期乏运动大鼠焦虑样行为具有改善作用，Wnt/β-catenin 信号通路及抗氧化调节可能参与脑保护作用。

• 甲醛固定石蜡包埋食管鳞状细胞癌组织蛋白提取方法的比较

  焦叶林,赵云岗,刘其伟,阮豪杰,高社干,齐义军

  目的： 探讨从甲醛固定石蜡包埋（FFPE）食管鳞状细胞癌（ESCC）组织中高效率提取蛋白质的方法。： 方法： 6种裂解液和100 ℃、105 ℃两种条件分别提取8例甲醛固定石蜡包埋食管鳞状细胞癌组织蛋白，Bradford法测定蛋白浓度、十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）、Western blotting和免疫组织化学评价各方法提取组织蛋白的效率和质量，不同蛋白沉淀方法纯化提取蛋白。： 结果： Laemmli裂解液（4号）100 ℃处理提取癌组织蛋白效率最高，Western blotting检测癌组织中14-3-3σ蛋白表达与免疫组织化学检测结果一致；2倍体积乙腈(含0.1%三氟乙酸)沉淀FFPE提取蛋白能够降低蛋白电泳背景。： 结论： Laemmli裂解液100 ℃处理可高效提取的甲醛固定石蜡包埋组织蛋白且适用于Western blotting检测蛋白标志物分子，乙腈蛋白沉淀法能够进一步去除残余的交联蛋白质分子。

• 鞘脂代谢与心血管疾病关系的研究进展

  李瑶,李俊磊,孙艳荣,杨齐岳,王文娟,王珂,秦丽华,张海澄

  鞘脂作为一种生物活性脂质，可参与生长、凋亡等多种重要生理过程的信号转导，且在包括心血管疾病在内的多种疾病状态中表现出了异常水平，提示鞘脂代谢参与心血管疾病的发生发展。本文中我们对鞘脂代谢过程及其代谢产物与冠心病、高血压、心律失常、心力衰竭这4种心血管系统常见病的关系、作用机制进行综述，并对鞘脂通路作为心血管疾病诊治潜在靶点提出了展望。

• 线粒体质量控制新途径：线粒体衍生囊泡

  官伟康,吕静,杨朝鲜

  线粒体是真核细胞中非常复杂的双膜细胞器。在生理状态下，线粒体再生和降解是平衡的；细胞器中的蛋白质、脂质和DNA等组分受到损伤时，通过分裂、融合、自噬等途径维持线粒体稳态，以保持线粒体结构和功能的完整，这一过程通常称为“线粒体质量控制”。线粒体衍生囊泡（MDV）是新近发现的线粒体质量控制途径，在细胞应激早期有助于维持线粒体功能稳定，并在线粒体氧化应激中发挥重要作用。我们拟综述MDV的发现、转运途径、货物的选择以及对细胞的生理影响等。

• 小鼠4倍体胚胎诱导蜕膜化反应

  张斌,焦熙堯,李华,张静,王浩洋,周荣艳,李相运

  目的： 探讨小鼠囊胚内细胞团（ICM）在蜕膜化过程中是否具有调控作用。： 方法： 采用电融合技术制备4倍体胚胎，作为内细胞团缺陷胚胎，通过输卵管胚胎移植制备4倍体胚胎诱导蜕膜组织，以正常2-细胞胚胎诱导的蜕膜组织作为对照，从着床位点和蜕膜形态对两组蜕膜进行比较分析后，采用高通量测序筛选两组中差异表达的微小RNA (miRNA)，生物信息学分析两组蜕膜中差异miRNA的靶基因，进行基因功能注释和通路富集分析。： 结果： 4倍体胚胎诱导的蜕膜组织与2-细胞胚胎诱导蜕膜组织在着床位点极为相似，但是蜕膜形态差异存在显著性。两组蜕膜中差异表达miRNA共有16个，与2-细胞胚胎诱导蜕膜相比，11个miRNA（miR-466f-3p、miR-302 d-3p、miR-466i-5p、miR-465c-5p、miR-302a-5p、miR-7068-3p、miR-741-3p、miR-302a-3p、miR-433-5p、miR-144-5p、miR-878-5p）在4倍体胚胎诱导蜕膜中表达上调，5个miRNA（miR-690、miR-193b-5p、miR-147-3p、novel_327、miR-363-3p）在4倍体胚胎诱导蜕膜中表达下调。生物信息学分析显示，差异miRNA功能主要集中在蛋白结合、离子束缚等功能，靶基因主要参与环磷酸鸟苷蛋白激酶G(cGMP-PKG)信号通路、雌激素信号通路、血管内皮生长因子(VEGF)信号通路等。： 结论： 内细胞团在蜕膜化反应过程中具有重要调控作用。

• 高龄女性移植2枚或3枚卵裂期胚胎的临床效果比较

  付磊,周雯慧

  目的： 探讨移植2枚或3枚胚胎与临床结局的关系，为高龄女性胚胎移植数的选择提供依据。： 方法： 对80个卵裂期胚胎新鲜移植周期进行回顾性分析，根据移植胚胎数将这些周期分组，并对各组的临床妊娠率、种植率、多胎妊娠率及活产率进行比较。： 结果： 对于年龄≥38岁的女性，当可利用胚胎数≥3枚时，移植2枚胚胎与移植3枚胚胎能够获得相似的临床妊娠率及活产率。这一趋势与所移植的8细胞胚胎数无关。： 结论： 高龄女性新鲜卵裂期胚胎移植数目不宜超过2枚。

• 转化生长因子β信号通路对卵泡刺激素调节卵巢颗粒细胞功能的影响

  王雨桐,卫晓红,葛玲,杨云风,徐健

  目的： 探讨大鼠卵巢颗粒细胞中卵泡刺激素（FSH）和转化生长因子β（TGF-β）信号通路之间的相互作用。： 方法： 取21 d SD大鼠卵泡分离的颗粒细胞原代培养，实验分为对照组、FSH处理组和转化生长因子β Ⅱ型受体(TGF-β RⅡ）中和组。通过免疫细胞化学和 Western blotting定位和检测TGF-β RⅡ以及增殖细胞核抗原（PCNA）的表达，通过流式细胞术(FCM)评估细胞增殖、细胞周期变化和凋亡细胞的百分比，并通过ELISA测定颗粒细胞分泌的雌二醇(E2)水平。： 结果： 当颗粒细胞的TGF-β信号通路受到抑制时，FSH促进颗粒细胞PCNA的表达，增加增殖指数，调节细胞周期以及抑制颗粒细胞凋亡的功能明显减弱(P<0.05）；FSH刺激颗粒细胞雌激素分泌的作用未明显受到TGF-β信号通路抑制的影响（P&gt;0.05）。： 结论： FSH对卵巢颗粒细胞的调节作用部分受TGF-β信号通路的影响。

• 微小RNA144-3p靶向作用于组蛋白去乙酰化酶2促进心肌细胞肥厚及心功能损伤

  谭含璇,彭绍蓉,黄蔡华,姜红峰,刘娟,龚芳

  目的： 探讨微小RNA（miR）144-3p促进心肌细胞肥厚及心功能损伤的作用及可能的机制。： 方法： 将45只C57BL/6小鼠随机分为对照组、心肌肥厚模型组及miR144-3p转染组，采用超声心动图检测3组小鼠心功能相关指标；实验结束后，处死小鼠，对心肌组织进行HE染色；采用Real-time PCR技术，检测各组小鼠心肌细胞中miR144-3p的表达差异；采用Western blotting检测心肌组织中脑钠肽（BNP）蛋白、抗核因子（ANF）蛋白、β-肌球蛋白重链（β-MHC）、肌动蛋白α1（Acta1）蛋白、组蛋白去乙酰化酶2（HDAC2）蛋白的表达水平。： 结果： 与对照组相比，模型组和转染组的左室射血分数（EF）、舒张期室间隔厚度（IVSd）、收缩期室间隔厚度（IVSs）、舒张期左室后壁厚度（IVPWd）、收缩期左室后壁厚度（IVPWs）、心重指数、左心指数明显较高，而收缩期左室内径（LVDs）、舒张期左室内径（LVDd）较低（P＜0.05），但模型组、转染组之间各项指标差异不明显（P＞0.05）。与对照组相比，模型组和转染组miR144-3p相对表达量明显升高，且转染组明显高于模型组（P＜0.05）。与对照组相比，模型组和转染组ANF、β-MHC、Acta1和HDAC2蛋白表达水平明显增高（P＜0.05）。： 结论： MiR144-3p可能通过上调HDAC2加重心肌肥厚及心功能损伤。

• 胚胎密度对卵裂期优质胚胎率的影响

  石程,陈淑文,王平,梁蓉,段胜男,陈曦

  目的： 通过调整协变量来探索培养的胚胎密度与第3天卵裂期胚胎发育结果之间的相关性。： 方法： 回顾性分析206对夫妇1196个胚胎体外受精-胚胎移植（IVF-ET）治疗的资料。培养条件为低氧，培养液每微滴体积为30 μl。以第3天卵裂期胚胎的优质胚胎率为终点指标对胚胎质量进行评价。选择女方年龄，男方年龄，窦卵泡数，抗苗勒管激素(AMH)水平，不孕症类型，控制性卵巢刺激(COS)方案，用药刺激时长，获卵数和授精方式为协变量。： 结果： 共有1196枚胚胎纳入分析，使用3种不同胚胎密度：30 μl/胚［1枚胚胎/（30 μl·滴）］、15 μl/胚［2枚胚胎/（30 μl·滴）］和10 μl/胚［3枚胚胎/（30 μl·滴）］进行培养，每组总胚胎数分别为434枚，646枚和116枚。10 μl/胚组第3天胚胎的优质胚胎率显著低于15 μl/胚和30 μl/胚组 (29.31% vs 40.25%，P<0.05；29.31% vs 42.17%，P<0.05)，15 μl/胚和30 μl/胚组之间的优质胚胎率差异不显著(40.25% vs 42.17%，P&gt;0.05)。在回归分析中，不调整任何协变量，10 μl/胚组第3天胚胎的优质胚胎率比30 μl/胚组下降43%(0.57，95%CI 0.32，1.03)，差异无统计学意义（P&gt;0.05）。调整了女性参与者AMH水平和授精方式后，10 μl/胚组第3天胚胎的优质胚胎率比30 μl/胚组显著降低51%(0.49，95% CI 0.27，0.90，P<0.05)。： 结论： 在30 μl微滴的低氧培养条件下，与单独培养相比，胚胎密度为10 μl/胚的集合培养不利于卵裂期胚胎发育，30 μl/胚为最适胚胎培养密度。

• 当归多糖对人白血病干细胞体外增殖与体内移植模型的影响

  邓方芳,耿珊,姜蓉,汪子铃,肖含先之,齐嵘嘉,黄彩虹,曾娣,李赓,王璐,王亚平

  目的： 探讨当归多糖(ASP)对人白血病干细胞(LSCs)增殖及体内移植的影响。： 方法1. ASP对CD34+CD38-人LSCs体外增殖的影响。免疫磁性法分选正常人和髓系白血病患者骨髓中CD34+CD38-细胞，分为正常CD34+CD38-对照组、CD34+CD38-LSCs对照组、正常CD34+CD38-ASP组和CD34+CD38-LSCs ASP组，后两组在常规培养基础上加入ASP（终浓度40 mg/L）。流式细胞术检测CD34+CD38- 细胞纯度；锥虫蓝染色检测细胞存活率；细胞计数试剂盒8（CCK-8）和混合集落形成单位（CFU-Mix）检测CD34+CD38-LSCs增殖分化能力；RT-PCR 检测衰老相关基因表达水平。2. ASP对人LSCs移植小鼠模型的影响。体内移植LSCs建立CD34+CD38- LSCs小鼠移植模型，随机分为ASP移植模型组［腹腔注射ASP，200 mg/kg，（1次/d）×14 d］和移植模型组（注射等时、等量生理盐水）。药物注射完成第2天，计数白细胞总数和分类计数，观察血细胞形态；免疫荧光细胞化学法检测受体鼠骨髓中CD34+CD38-LSCs；衰老相关β-半乳糖苷酶（SA-β-Gal）染色检测染色阳性骨髓单核细胞（BMMCs）百分率；流式细胞术检测BMMCs细胞周期分布；CFU-Mix培养检测BMMCs集落形成能力。： 结果： 分选后CD34+CD38-细胞纯度达到（91.14±1.02）%，细胞存活率为（95.42±3.5）%；CD34+CD38-LSCs对照组细胞增殖与集落形成能力显著高于正常CD34+CD38-对照组；CD34+CD38-LSCs ASP组细胞增殖能力与集落形成能力明显低于CD34+CD38- LSCs对照组；CD34+CD38-LSCs ASP组细胞高表达p16INK4a、p19Arf、p53、p21Cip1/Waf1基因。移植CD34+CD38-LSCs后小鼠骨髓中存在人源性LSCs。移植模型组小鼠白细胞总数增加，中性粒细胞比例升高，淋巴细胞比例降低；注射ASP可明显降低白细胞总数和中性粒细胞比例，淋巴细胞比例有所升高；处于G0/G1期中的BMMCs数量增加，S期细胞数量减少；SA-β-Gal染色阳性细胞百分率明显提高；CFU-Mix集落形成数显著减少。： 结论ASP在体内与体外均能抑制CD34+CD38-LSCs增殖，推测其可能机制与ASP调节细胞衰老相关基因表达密切相关。

• 分泌EphrinAl-Caspase-3的T淋巴细胞对裸鼠乳腺癌组织生长的抑制作用

  时娅琪,唐洗敏,李庄,张丽梅,鲁雪静,周凌智,徐芒,黄煜,李艳娇,张本斯

  目的： 探讨分泌EphrinAl-Caspase-3的T淋巴细胞体内移植对癌细胞的抑制作用。： 方法将裸鼠（n=35） 接种乳腺癌细胞，构建裸鼠乳腺癌模型。待肿瘤体积达到0.1 cm3大小，选取30只具有平均大小瘤组织的裸鼠随机分为PBS组、未感染腺病毒组、感染Ad-EphrinA1-Caspase-3的T淋巴细胞组，经瘤内移植，每隔2~3 d测量肿瘤大小。另选取3组荷瘤裸鼠，经上述细胞移植后，每隔2~3 d获取裸鼠皮下肿瘤组织匀浆，ELISA检测EphrinA1-Caspase-3的含量。实验结束后各组动物断颈处死剥离肿瘤制成切片，在荧光显微镜下观察表达绿色荧光蛋白的T淋巴细胞，免疫荧光法进行Caspase-3、Ki-67的检测。： 结果乳腺癌细胞接种裸鼠1周后可用手摸到皮下肿瘤，证明乳腺癌细胞荷瘤动物模型制做成功。接种后第8天各组裸鼠肿瘤体积差异变大，治疗组与PBS组/T淋巴细胞组相比差异极显著（P<0.05）。单纯T淋巴细胞移植组肿瘤体积虽较PBS对照组生长缓慢，但两者间并无明显统计学差异。EphrinA1-Caspase-3治疗组第2天可以检测出EphrinA1-Caspase-3的表达，第8天达到高峰，随后分泌量逐渐降低。PBS对照组和T淋巴细胞组未检测到EphrinA1-Caspase-3的表达。在治疗组肿瘤组织中观察到分散的绿色荧光蛋白标记的EphrinAl-Caspase-3-T淋巴细胞，而在PBS组和T淋巴细胞组中未检测到绿色荧光蛋白的存在。治疗组感染细胞中，Caspase-3阳性细胞比例上调，Ki-67阳性细胞比例下调。在PBS组和T淋巴细胞组未检测到EphrinAl-Caspase-3的表达。： 结论EphrinAl-Caspase-3可显著抑制乳腺癌细胞的生长，发挥抗肿瘤效应。

• 规律间隔成簇短回文重复序列/相关蛋白9靶向Rho GDIα基因敲除质粒的构建及其对小鼠肝癌细胞系Hepa 1-6迁移的影响

  曲明娟,李延敏,谢静,秦苗苗,王静,周菊华

  目的 利用规律间隔成簇短回文重复序列/相关蛋白9（CRISPR/Cas9）技术构建Rho鸟苷酸解离抑制因子α（GDIα）的基因敲除载体，并探讨干扰Rho GDIα后对小鼠肝癌细胞Hepa 1-6迁移的影响。： 方法： 根据CRISPR/Cas9靶点设计原则，设计Rho GDIα的向导RNA（sgRNA）序列，并与PX458载体相连，构建Rho GDIα基因敲除重组质粒PX458-Rho GDIα-sgRNA1和PX458-Rho GDIα-sgRNA2；脂质体转染法将重组质粒转染入Hepa 1-6细胞抑制Rho GDIα的基因表达；RT-PCR法检测Rho GDIα被抑制后的mRNA表达情况；划痕法检测Rho GDIα干扰后Hepa 1-6细胞迁移距离的差异；迁移小室法检测抑制Rho GDIα后Hepa 1-6细胞迁移数量的差异。： 结果： 成功构建了Rho GDIα的CRISPR/Cas9基因敲除质粒PX458-Rho GDIα-sgRNAs；转染有PX458-Rho GDIα-sgRNA1的Hepa 1-6 细胞与对照组只转染空载体PX458的细胞相比，Rho GDIα的表达被明显抑制（P<0.05），而且该组细胞从划痕起始处迁移到空白处距离较远，从迁移小室上端迁移到底端数目明显增多，差异极其显著（P<0.01），说明Rho GDIα被抑制后肝癌细胞的迁移能力提高。： 结论： CRISPR/Cas9法构建的重组质粒PX458-Rho GDIα-sgRNA1可以有效抑制Rho GDIα的基因表达；Rho GDIα被抑制后明显促进小鼠肝癌细胞Hepa 1-6的迁移，提示在体情况下，Rho GDIα的表达可能起到抑制细胞迁移的重要作用，在肿瘤组织中，可以利用过表达Rho GDIα来抑制肿瘤细胞的转移。

• Rab1A对多发性骨髓瘤细胞系8226增殖和凋亡的影响

  吴含,王秀红,吴婷婷,杨粟

  目的： 探讨Rab1A对多发性骨髓瘤(MM)细胞系8226增殖和凋亡的影响。： 方法采用siRNA干扰Rab1A表达，将多发性骨髓瘤细胞8226分为空白对照组、阴性对照组和Rab1A siRNA组。其中空白对照组的多发性骨髓瘤细胞8226不做任何处理，阴性对照组的多发性骨髓瘤细胞8226转染阴性对照siRNA。Rab1A siRNA组转染Rab1A特异性siRNA。应用集落形成、CCK-8细胞增殖实验分析Rab1A对多发性骨髓瘤细胞8226增殖的影响。采用流式细胞技术检测多发性骨髓瘤细胞8226的凋亡情况。采用Western blotting和Real-time PCR技术检测Rab1A siRNA对c-Myc、cyclin D1、Bcl-2及Bax表达的影响。： 结果Rab1A siRNA组多发性骨髓瘤细胞8226的Rab1A mRNA和Rab1A 蛋白的表达显著较阴性对照组下调；集落形成、 CCK-8细胞增殖实验结果显示，Rab1A siRNA可抑制多发性骨髓瘤细胞8226增殖；Rab1A siRNA组多发性骨髓瘤细胞8226的凋亡比例显著较阴性对照组增加（P<0.01）；Rab1A siRNA组c-Myc、cyclin D1和Bcl-2的蛋白表达量显著较阴性对照组下调（P<0.01），Bax蛋白水平的表达量显著较阴性对照组上调（P<0.01）。： 结论Rab1A可能通过调控c-Myc、cyclin D1、Bcl-2和Bax的表达促进多发性骨髓瘤细胞8226增殖，而RablA siRNA可有效抑制RPMI-8226细胞RablA的表达，从而抑制其增值，并促进凋亡。

• 蜂毒肽诱导人肝癌细胞系SMMC-7721程序性坏死

  李亚巍,张巍,李妍,侯建成,张红,朱文赫

  目的探讨蜂毒肽（MLT）对人肝癌细胞系SMMC-7721的杀伤作用及可能机制。： 方法采用MTT法检测不同浓度蜂毒肽对人肝癌细胞系SMMC-7721的杀伤及程序性坏死特异性抑制剂-1 (Nec-1)对蜂毒肽杀伤SMMC-7721细胞的抑制作用。Hoechst 33342及PI双染色观察细胞程序性坏死的发生，流式细胞术检测细胞程序性坏死率，透射电子显微镜检测细胞超微结构变化，Western blotting法检测SMMC-7721细胞内受体相互作用蛋白1(RIP1)的表达变化。： 结果与对照组比较，不同浓度蜂毒肽作用SMMC-7721细胞24 h后，细胞增殖活力明显下降(P<0.05)；细胞染色呈深蓝色和红色的形态；细胞膜完整性被破坏、细胞器肿胀、细胞器膜被破坏、核膜完整性丧失，表明细胞发生坏死；Westen blotting结果显示，SMMC-7721细胞内RIP1表达比例升高。与蜂毒肽给药组比较，Nec-1预处理组细胞增殖活力显著提高，细胞坏死率降低，细胞内RIP1表达下调。： 结论蜂毒肽通过RIP1介导的程序性坏死途径诱导SMMC-7721细胞死亡。

• 微小RNA-513c-5p在宫颈癌中的表达及靶向组蛋白去乙酰化酶1调节宫颈癌细胞迁移和侵袭的机制

  王丽娜,刘永娟,张莹,刘荣霞,梁珊,宋春红,崔娜

  目的： 探讨微小RNA（miR)-513c-5p在宫颈癌中的表达及靶向组蛋白去乙酰化酶1（HDAC1）调节宫颈癌细胞迁移和侵袭的机制。：方法： 临床收集宫颈癌患者86例，通过Real-time PCR检测肿瘤组织和癌旁组织中miR-513c-5p水平，分析其与宫颈癌病理特征的关系。通过双荧光素酶报告验证miR-513c-5p靶向HDAC1。将宫颈癌HeLa细胞系分为4组：对照组、类似物(mimic)组、mimic+HDAC1组和HDAC1组。通过质粒转染技术过表达miR-513c-5p和(或)HDAC1。Real-time PCR和Western blotting分别用于检测RNA或蛋白的表达水平。分别通过CCK-8法、细胞划痕实验和Transwell实验检测各组的细胞生长、迁移和侵袭能力。 结果： 宫颈癌组织中miR-513c-5p水平显著低于癌旁组织。低水平的miR-513c-5p与更高的局部侵袭、淋巴转移和远端转移有关（P<0.05）。miR-513-5p靶向抑制HDAC1表达。过表达miR-513c-5p显著抑制宫颈癌细胞生长、迁移和侵袭（P<0.05）。过表达HDAC1促进细胞生长、迁移和侵袭（P<0.05），并且可以逆转miR-513c-5p的抑制作用（P<0.05）。： 结论： 低水平的miR-513c-5p可能与宫颈癌转移有关，并且miR-513c-5p可通过靶向抑制HDAC1蛋白的表达抑制宫颈癌HeLa细胞生长、迁移和侵袭。

•  微小RNA-27a在子宫颈癌中的表达变化及作用机制

  仉红平,李峰,牛占杰

  目的： 探讨微小RNA（miR)-27a靶向调控F框/WD-40域蛋白7（FBXW7）对子宫颈癌细胞的增殖、凋亡及侵袭的影响。： 方法： 30例宫颈癌组织和癌旁组织、30例正常宫颈组织新鲜标本用于实验。Real-time PCR检测宫颈癌、癌旁组织、正常宫颈组织以及宫颈癌细胞（SiHa、Caski、HeLa、HCC94）、子宫颈鳞状上皮永生化细胞H8中miR-27a的表达。应用脂质体转染法将miR-27a抑制剂（inhibitor）及其阴性对照转染至SiHa细胞，CCK-8法、流式细胞术、Transwell法分别检测miR-27a对SiHa细胞增殖活性、细胞周期、凋亡率和侵袭能力的影响。生物学信息法预测miR-27a的靶向基因，双荧光素酶报告基因实验结合Western bloting验证miR-27a对FBXW7的靶向调控作用。： 结果： 与癌旁组织和正常宫颈组织相比，宫颈癌组织中miR-27a高表达（P<0.05）；与子宫颈鳞状上皮永生化细胞H8相比，宫颈癌细胞SiHa、Caski、HeLa、HCC94中miR-27a高表达（P<0.05）。抑制SiHa细胞中miR-27a的表达，能够明显降低细胞的增殖活性（P<0.05），提高G0/G1期细胞比例（P<0.05），降低S期和G2/M期细胞比例（P<0.05）， 提高细胞凋亡率（P<0.05），抑制细胞的侵袭能力（P<0.05）。生物学信息法预测FBXW7可能是miR-27a的靶向调控基因；双荧光素酶报告基因实验显示，miR-27a可以与FBXW7基因的3’UTR区特异性结合（P<0.05）， 并负调控FBXW7蛋白的表达（P<0.05）。： 结论： MiR-27a在宫颈癌的发生发展中起着癌基因的作用，抑制miR-27a表达能够明显抑制宫颈癌细胞的恶性生物学行为，其机制可能与靶向调控FBXW7的表达有关。

• 内蒙古地区枕骨髁及枕骨大孔应用解剖三维数字化测量

  邬超,王一丹,关欢欢,高明杰,张云凤,王海燕,和雨洁,高尚,李志军,李筱贺

  目的 利用三维重建测量枕骨髁（OC）及枕骨大孔（FM）解剖学结构，分析OC、FM形态学特征及相对位置关系，为颅颈交界区病变的影像学诊断及外科手术入路的选择提供解剖学参数。： 方法选取60 例正常者的头颅和上颈椎螺旋CT扫描图像，男、女各30例， 年龄 20～65（48.18±16.17）岁，将数据导入Syno.Via VB10B软件，头颅三维重建，观察OC及FM形态，测量枕骨髁长、宽、高、内倾角（CIA），枕骨大孔纵径、横径、面积，头颅眉间点到颅后点的最大距离（SML），在SML直线上头颅眉间点到枕骨髁后缘连线的距离（GOCP），枕骨大孔前缘到枕骨髁后缘连线的垂直距离（AOCP），左、右侧枕骨髁内侧缘到Y轴距离（OC-M），左、右侧枕骨髁后缘到X轴距离（OC-P），枕骨髁分类指数（OCI），枕骨髁相对于头颅的分类指数（SOCI），在SML直线上中点到枕骨髁后缘连线距离（COCP,COCP=GOCP-SML/2），并确定左、右枕骨髁相对位置关系的类型。： 结果 枕骨髁解剖学长、宽、高男性大于女性，性别间差异有统计学意义（P<0.05）；枕骨大孔面积、枕骨大孔纵径、SML、GOCP、AOCP性别间差异有统计学意义（P<0.05）。CIA左侧大于右侧，侧别差异有统计学意义（P<0.05）。OC-M、OC-P侧别差异有统计学意义（P<0.05），前者右侧大于左侧；后者左侧大于右侧。枕骨大孔纵径与枕骨大孔面积、AOCP成正相关。OCI分类结果：Ⅰ型（OCI<0.45）8例（13.33%），Ⅱ型（0.45≤OCI<0.50）47例（78.33%），Ⅲ型（OCI≥0.50）5例（8.33%）。SOCI分类结果：Ⅰ型（SOCI<0.60）2例（3.33%），Ⅱ型（0.60≤SOCI<0.75）54例（90.00%），Ⅲ型（SOCI≥0.75）4例（6.67%）。： 结论： 内蒙古地区人群枕骨髁解剖学参数提示，该部位可以进行枕骨髁螺钉置入，枕骨髁相对于枕骨大孔、头颅的位置变异性大。

• 室间孔周围静脉的磁敏感加权成像

  姚笑笑,李昌盛,陈黛茜,郭玉,缪慧中,杨新东,陈争珍,陈成春

  目的： 显影室间孔区域静脉及属支，建立三维图像，构建该区静脉网络，探讨室间孔与周围静脉的空间位置关系。： 方法： 筛选60名健康志愿者行3.0 T MR头部扫描，利用最小密度投影（mIP）和交互式医学图像控制系统（Mimics）对原始图像进行后处理，构建室间孔周围静脉网络，对室间孔及周围静脉的解剖学形态进行观察分析。： 结果： 室间孔显示率为65%（78侧）；大脑内静脉（2.13±0.30）mm，100%（120侧）；透明隔前静脉（0.69±0.19）mm，100%（120侧）；丘纹上静脉（1.47±0.38）mm，98.3%（118侧）；脉络膜上静脉（0.40±0.18）mm，82.5%（99侧）。根据大脑内静脉属支汇入点与室间孔位置关系分为：ⅠA型，24.2%（29侧），即透明隔前静脉汇入大脑内静脉点位于静脉角且紧邻室间孔的后缘；ⅠB型，13.3%（16侧），即透明隔前静脉汇入大脑内静脉点远离静脉角且远离室间孔的后缘；ⅡA型，45%（54侧），即透明隔前静脉汇入大脑内静脉点位于假静脉角且远离室间孔；ⅡB型，15.8%（19侧），即透明隔前静脉汇入大脑内静脉点远离假静脉角和室间孔；Ⅲ型，1.7%（2侧），即丘纹上静脉缺如型。： 结论： 磁敏感加权成像（SWI）技术能清晰成像室间孔及其周围静脉，结合Mimics技术可构建大脑内静脉及其属支、室间孔与主要静脉汇合点三维空间位置数据。大脑内静脉属支汇入点与室间孔位置关系分型对室间孔区手术入路选择有重大意义。

• 枕颈角与后枕颈角影像学参数的数字化测量及其临床意义

  曲星月,卜佳琪,史君,段瑾东,周雯卉,李志军,王星,张少杰

  目的： 探讨影像学参数枕颈角（OC2A）和后枕颈角（POCA）在性别、年龄之间变化规律及相关性，为枕颈融合术中固定头颈位置的角度提供参考。： 方法： 收集473例（男性339例、女性134例）影像学资料，以性别分2组，每组又以年龄分为≤29岁、30～39岁、40～49岁、50～59岁、60～69岁和≥70岁各6组。将扫描的颈椎断层影像原始数据以DICOM格式存贮，并导入Mimics16.0软件中测量OC2A与POCA，对两者值随性别、年龄的变化行统计学分析。： 结果： OC2A和POCA在性别间差异无显著性（P&gt;0.05）。OC2A男性组中30~39岁除与≤29岁男性组外，其余组间差异均存在显著性（P<0.05），而女性组各年龄组间差异均无显著性（P&gt;0.05）； POCA男性30～39岁组中除与≤29岁以下组外，与其余组间差异显著（P<0.05），而40～49岁组则与每组间差异均存在显著性（P<0.05），女性组中则≤29岁组与各年龄组间差异存在显著性（P<0.05），其余各组间差异不显著（P&gt;0.05）；Pearson相关分析显示，OC2A与POCA即两者间不存在相关性 (r=0.038，P&gt;0.05)。： 结论： OC2A和POCA值在性别间无差异；男性OC2A和POCA值各年龄段间存在差异，提示临床注意考虑男性年龄差异；而女性OC2A值各年龄段间无差异，POCA却在各年龄段间有差异，OC2A和POCA值在不同年龄段和性别间的变化规律，为枕颈融合术中固定头颈解剖复位角度提供参数依据。

• 骶椎腰化患者脊柱-骨盆矢状面解剖学参数测量及下腰椎有限元力学分析

  毕殿海,罗少林,裴娜,曾欢高

  目的： 基于EOS影像系统测量无症状骶椎腰化患者脊柱-骨盆矢状面解剖学参数，同时利用有限元分析方法评估弯腰情况下骶椎腰化患者下腰椎的受力情况。： 方法： 共纳入经EOS影像系统检查的44例受试者，其中骶椎腰化患者11例，依据性别及年龄且按照1∶3的比例纳入正常受试者33例。两组患者均测量并比较脊柱-骨盆矢状面参数：腰椎前凸角（LL）、骨盆投射角（PI）、骨盆倾斜角（PT）及骶骨倾斜角（SS），采用Pearson检验分析两组受试者PI与LL间相关性。同时利用有限元分析的方法，建立骶椎腰化下腰椎的有限元模型，分析前屈、后伸、左右弯腰动作时下腰椎模型的受力情况。： 结果： 两组患者PI、PT、SS及LL比较，差异均具有统计学意义（P＜0.05）。相关性研究发现，两组受试者PI与LL均成正相关，其中骶椎腰化组（r=.0.69，P<0.05）、正常组（r=0.52，P<0.05）。 模型进行前屈、后伸、左侧弯腰、右侧弯腰状态下，弯矩均为2 Nmm，应力集中现象均由下向上逐渐减小，最大应力集中点位于下关节突处。： 结论： 骶椎腰化患者的腰椎生理曲度及受力分布较正常者具有明显差异，尤其移行椎椎间盘与关节突关节应力集中现象明显，容易出现脊柱早期退变。

• 腹腔镜下精准解剖定位行前列腺癌或膀胱癌根治术降低术后苏醒延迟发生风险

  李映云,周志军

  目的： 探讨腹腔镜下前列腺癌或膀胱癌根治术术后苏醒延迟的危险因素，为临床早期防治提供信息。： 方法： 选择2016年9月~2019年1月期间于南通市第二人民医院行腹腔镜下前列腺癌或膀胱癌根治术治疗的327例患者作为观察对象，对患者的临床资料、手术资料进行收集，统计术后苏醒延迟发生率，经Logistic回归分析法分析苏醒延迟的危险因素。： 结果： 腹腔镜下前列腺癌或膀胱癌根治术术后苏醒延迟检出61例，发生率是18.7%（61/327）；单因素分析发现，腹腔镜下前列腺癌或膀胱癌根治术术后苏醒延迟与患者年龄、合并冠心病、糖尿病、呼吸系统疾病、贫血及吸烟、饮酒、美国麻醉医师协会（ASA）分级、麻醉时间、术中输液总量、复合硬膜外麻醉、解剖定位标志位置清晰度和术中输血存在相关性，差异有统计学意义（P＜0.05）；多因素Logistic回归分析发现，患者年龄、合并糖尿病、伴呼吸系统疾病、贫血、吸烟、饮酒、术中输液总量和解剖定位标志位置清晰度为腹腔镜下前列腺癌或膀胱癌根治术，术后苏醒延迟的独立危险因素，差异有统计学意义（P＜0.05）。： 结论： 腹腔镜下前列腺癌或膀胱癌根治术,术后苏醒延迟和患者年龄、合并糖尿病、呼吸系统疾病、贫血，吸烟、饮酒、解剖定位标志位置清晰度和术中输液总量存在相关性，提示针对存在上述危险因素的患者，需给予对症干预，可以降低术后苏醒延迟发生风险。精准的解剖定位可防止术中的危险反应，利于患者术后恢复，患者对应住院时间极大地缩短。