解剖学报

作者：林维,李超艺,唐捷,张丕军

单位：海南医学院第二附属医院关节外科，海口 570311

关键词：骨质疏松症, 微小RNA-494, 外泌体, 骨代谢, 骨重建平衡, 实时定量聚合酶链反应, 免疫印迹法, 大鼠

基金：海南省卫生健康行业科研项目

目的 探讨成骨细胞来源的外泌体（Exo）中微小RNA(miR)-494对骨质疏松症（OP）大鼠骨代谢与骨重建平衡的影响及其机制。 方法 从MC3T3-E1成骨细胞系中分离鉴定Exo，并将miR-494电转至Exo，Real-time PCR测定miR-494表达水平。40只SD大鼠随机分为对照组、模型组、miR-494模拟剂（miR-494）组和miR-494抑制剂组，每组10只。除对照组外，其余3组大鼠切除卵巢构建OP模型。模型制作成功后，miR-494组与miR-494 抑制剂组分别接受含相应miRNA的Exo尾静脉注射，剂量为3×109个微粒。4周后，Micro-CT检测各组大鼠的骨参数，ELISA测定血清骨标志物，HE染色观察骨组织病理变化，抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)染色检测破骨细胞数量，Western blotting测定骨重建相关蛋白及Toll样受体4(TLR4)相关通路蛋白表达水平。 结果 成功从MC3T3-E1细胞中分离得到典型杯状或圆形，直径约100 nm的Exo，其含有CD63、CD9、肿瘤易感性基因101(TSG101)、热休克蛋白70(HSP70)蛋白，且能被MC3T3-E1细胞摄取。经电转处理后，miR-494模拟剂和miR-494 抑制剂的Exo中miR-494的相对表达量明显升高和降低（P<0.05）。与模型组相比，miR-494组大鼠骨参数降低，血清骨标志物骨钙蛋白(BGP)、TRACP、Ⅰ型胶原C端肽(CTX-Ⅰ )升高，骨保护蛋白(OPG)、Ⅰ型前胶原N端肽( PⅠNP)降低，骨小梁结构紊乱，破骨细胞增加，骨组织内骨形态发生蛋白2(BMP-2)、Runt相关转录因子2(RUNX2)下调，核因子κB受体激活剂配体(RANKL)上调，TLR4、核因子κB (NF-κB) p65及髓样分化主要响应蛋白88(MyD88)上调（P<0.05）。而miR-494 抑制剂组情况则相反，骨参数和OPG、 PⅠNP 升高，BGP、TRACP、CTX-Ⅰ降低，骨结构恢复正常，破骨细胞减少，骨组织内BMP-2、RUNX2上调，RANKL下调，TLR4、NF-κB p65及MyD88下调（均P<0.05）。 结论 Exo传递miR-494可加重OP大鼠骨代谢异常，并抑制骨重建平衡，推测其作用机制可能与调控TLR4通路有关。

来源：2024年第3期

《解剖学报》期刊编辑部

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