解剖学报

作者：李瑞婷,雷凌峰,杨娜,向治俞,李泽锴,陆利

单位：1.山西医科大学基础医学院人体解剖学教研室，太原 030001; 2.山西医科大学第二临床医学院耳鼻咽喉科，太原 030001;3.山西医科大学临床医学（“5+3”一体化）新医科精准医学班，太原 030001

关键词：胆固醇, 室管膜下区, 神经发生, 神经干细胞, 免疫荧光, ob/ob小鼠 

基金：山西省回国留学人员科研资助项目;山西省高等学校教学改革创新项目

目的： 检测胆固醇对ob/ob肥胖小鼠神经干细胞（NSCs）增殖和分化能力的影响，探讨肥胖引起中枢神经系统功能障碍的可能机制。：： ：方法： 选取4月龄ob/ob和野生型（WT）小鼠各6只，运用细胞增殖抗原（Ki67）和双皮质素（DCX）免疫荧光染色检测ob/ob小鼠侧脑室室管膜下区（SVZ）神经发生水平；分离培养18只4月龄ob/ob和WT小鼠SVZ的 NSCs，运用BrdU掺入实验和β-Ⅲ-微管蛋白（Tuj1）免疫荧光染色检测NSCs的自我更新和分化能力。运用基质辅助激光解飞行时间质谱（MALDI-MS）分别检测3只ob/ob和WT小鼠脑组织的脂质分布，并分析胆固醇（ST）含量和胆固醇合成相关基因的表达变化。体外培养15只WT新生鼠（P0）SVZ 的NSCs，并通过电穿孔法转染胆固醇合成限速酶3-羟基-3-甲基-戊二酰辅酶 A还原酶（Hmgcr）的小干扰RNA（siRNA），验证敲减效率，并通过BrdU掺入实验和Tuj1免疫荧光染色检测Hmgcr基因敲减对NSCs的影响。：： 结果： 与WT小鼠相比，ob/ob 小鼠SVZ部位 Ki67+和DCX+ 细胞数量均显著下降（P<0.05）。体外实验结果显示，ob/ob小鼠NSCs的BrdU阳性率（P<0.05）和Tuj1阳性率（P<0.05）较WT小鼠NSCs显著下降。MALDI-MS结果显示，在ob/ob小鼠SVZ部位，ST（26∶0）和ST（27∶3）分布较WT小鼠明显减少；同样，试剂盒检测结果显示，与WT小鼠相比，ob/ob小鼠SVZ组织及NSCs的胆固醇含量显著降低（P<0.05）； Real-time PCR结果显示，ob/ob小鼠SVZ组织和NSCs的胆固醇合成相关基因Hmgcr、羊毛甾醇 14α-脱甲基酶（Cyp51）、3-β-羟基类固醇-Δ8,Δ7-异构酶（Ebp）和角鲨烯合酶（Fdft1）的mRNA表达水平均较WT小鼠显著下降（P<0.05），提示ob/ob小鼠SVZ的胆固醇合成障碍。Real-time PCR结果显示，Hmgcr-siRNA的干扰效率为55.27%±8.768%（P<0.05），Western blotting结果显示，Hmgcr-siRNA的干扰效率为32.69%±8.056%（P<0.05）；BrdU掺入实验结果显示，Hmgcr-siRNA组的BrdU阳性率较对照（control）组显著下降（P<0.05）；1% FBS诱导分化后，Hmgcr-siRNA组Tuj1阳性率较control组也显著下降（P<0.05），提示胆固醇合成受损抑制神经干细胞的自我更新和分化能力。：： 结论： ob/ob小鼠脑内胆固醇水平下降可影响SVZ部位 NSCs增殖分化能力。：

来源：2023年第2期

《解剖学报》期刊编辑部

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