解剖学报

作者：程全成,樊婧,刘怀存,丁慧如,方璇,王建伟,陈春花,张卫光

单位：北京大学基础医学院人体解剖学教研室，北京 100191；

关键词：水通道蛋白9, 规律间隔成簇短回文重复序列/相关蛋白9, 基因敲除, 基因型鉴定, 小鼠 

基金：北京市自然科学基金

目的： 利用CRISPR/Cas9系统敲除小鼠水通道蛋白9(AQP-9)基因，构建稳定敲除AQP-9基因的纯合子AQP-9-/-小鼠。：： 方法： 根据CRISPR/Cas9靶点设计原则，在Ensembl数据库上找到AQP-9基因序列的外显子区域，综合分析选定AQP-9-202的公共外显子2，前期在其两边设计7个小向导RNA（sgRNA）靶点，选择合适靶点，将AQP-9敲除。用PCR以及基因测序手段检测基因敲除效果。获得F1代杂合子小鼠后，继而提供10只野生型小鼠（雌雄各5只）进行繁育，以期得到纯合子AQP-9-/-小鼠。：： 结果： 前期设计的7个sgRNA靶点基因活性均在95%以上，选择L2和R2作为最终的sgRNA靶点。注射受精卵74枚，移植60枚，得到6只F0代阳性鼠。经过繁育鉴定，最终得到稳定敲除AQP-9基因的纯合子AQP-9-/-小鼠。：： 结论： 利用CRISPR/Cas9系统获得全身敲除AQP-9基因且可稳定遗传的纯合子AQP-9-/-小鼠。：

来源：2022年第1期

《解剖学报》期刊编辑部

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