解剖学报

作者：李游,徐丽明,张琦敏,杨素芳,卢春花

单位：1. 广西大学生命科学与技术学院，南宁 530004; 2. 广西国际壮医医院生殖健康与不孕症科，南宁 530201；

关键词：Copine-3, 真核表达, 支气管上皮细胞, 免疫荧光, 免疫印迹法, 人

基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金;广西自然科学基金;广西自然科学基金;广西研究生教育创新计划项目

目的： 构建增强型绿色荧光蛋白（pEGFP)-N1-CPNE3真核表达载体，检测Copine-3蛋白在细胞中的表达和定位。：： 方法： 利用RT-PCR从人支气管上皮细胞（HBE）中扩增得到编码Copine-3蛋白的CPNE3基因，并亚克隆至pEGFP-N1真核表达载体。将酶切鉴定和测序正确的pEGFP-N1-CPNE3重组质粒转染293T和H1299细胞。激光扫描共焦检测Copine-3-EGFP融合蛋白的细胞定位，Western blotting检测亚细胞组分中Copine-3蛋白的表达，免疫组织化学检测肺腺癌患者癌临床样品中的Copine-3蛋白定位。： ：结果： 编码Copine-3蛋白的CPNE3基因克隆到了pEGFP-N1真核表达载体中，并在293T和H1299细胞中表达。通过免疫荧光染色、Western blotting和免疫组织化学确定Copine-3蛋白定位于细胞质和细胞核。：： 结论： 成功构建pEGFP-N1-CPNE3真核表达载体，Copine-3蛋白定位于细胞质和细胞核。

来源：2021年第3期

《解剖学报》期刊编辑部

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