解剖学报

作者：曲明娟,郑煜,李延敏,宋洋,王蕾,周菊华

单位：鲁东大学生命科学学院，山东 烟台 264025；

关键词：规律间隔成簇短回文重复序列/相关蛋白9, 小向导RNA, 肝癌细胞, 转化生长因子β, Smads蛋白, 四甲基偶氮唑盐法, 小鼠

基金：国家自然科学基金项目;鲁东大学科技项目

目的： 构建靶向叉头框蛋白J2（FOXJ2）的规律间隔成簇短回文重复序列/相关蛋白9（CRISPR/Cas9）基因敲除质粒，探讨干扰FOXJ2基因后对小鼠肝癌细胞Hepa1-6的信号通路转化生长因子β/Smads家族蛋白（TGF-β/Smads）表达和增殖的影响。： ：方法： 设计小鼠FOXJ2的小向导RNA（sgRNA）序列，与PX458载体连接并转化感受态大肠埃希菌，挑取单克隆扩增提质粒。利用脂质体将重组质粒PX458-FOXJ2-sgRNAs转染入肝癌细胞Hepa1-6，对照组只转染空载体，48 h后RT-PCR检测对Hepa1-6细胞FOXJ2的抑制作用，同时检测FOXJ2被抑制后TGF-β和Smads的表达情况；MTT法检测干扰FOXJ2后对肝癌细胞增殖能力的影响。：： ：结果： 成功构建3个FOXJ2的CRISPR/Cas9基因敲除质粒PX458-FOXJ2-sgRNAs，其中质粒PX458-FOXJ2-sgRNA2可以有效抑制FOXJ2的表达，同时检测到干扰了FOXJ2的细胞的TGF-β、Smad2和Smad4的表达均高于对照组，差异显著；并且FOXJ2被抑制组肝癌细胞的增殖能力明显提高。：： ：结论： 小鼠肝癌细胞中的FOXJ2基因在一定程度上抑制TGF-β、Smad2和Smad4基因的表达，抑制细胞的增殖，推测在体情况下，肝癌细胞的增殖和TGF-β信号通路的激活与FOXJ2基因的负调控有一定的相关性，FOXJ2可以作为肝癌预防和治疗的靶点分子进行干预。

来源：2021年第2期

《解剖学报》期刊编辑部

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