解剖学报

作者：肖云萍,解宇浩,张嘉琪,郭佳琦,丁旭,郝峰,王国庆

单位：1. 吉林医药学院检验学院，吉林 吉林 132013; 2.北华大学医学技术学院，吉林 吉林 132013；

关键词： 钙激活氯离子通道, 细胞模型, 第二信使, Ca2+浓度, 流式细胞术

基金：国家自然科学基金项目;吉林省教育厅基金资助课题;吉林省教育厅基金资助课题;吉林省卫生与健康技术创新项目;吉林医药学院启动资金;国家级大学生创新创业训练计划;吉林省大学生创新创业训练计划

目的： 建立一种基于钙激活氯离子通道（CaCC）可敏感检测胞质内第二信使Ca2+的细胞模型。：： 方法： 构建氯离子通道蛋白1（ANO1）和YFP-H148Q/I152 L真核表达载体，应用脂质体转染法构建共表达ANO1和YFP-H148Q/I152 L的FRT细胞，倒置荧光显微镜观察其表达情况，流式细胞仪检测细胞纯度；应用膜片钳技术研究CaCC生理特性；荧光淬灭动力学实验验证细胞模型的有效性；荧光淬灭动力学实验验证细胞模型可筛选CaCC调节剂；荧光探针法检测加入CaCC激活剂后胞质内的Ca2+浓度。：： 结果： 倒置荧光显微镜下观察到ANO1表达在细胞膜上，YFP-H148Q/I152 L表达于胞质中；该模型具有经典的钙激活氯离子通道的生理特性；成功构建共表达ANO1和YFP-H148Q/I152 L的FRT细胞模型；该模型可筛选CaCC调节剂，荧光变化斜率值与CaCC调节剂浓度成剂量依赖关系；荧光变化斜率值可反映胞质内Ca2+浓度，该模型可敏感检测胞质内Ca2+浓度。：： 结论： 此细胞模型可以高效敏感检测胞质内第二信使Ca2+浓度，为Ca2+信号相关靶点的研究提供了一种简便快捷的方法。

来源：2021年第2期

《解剖学报》期刊编辑部

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