解剖学报

作者：王彤彤,叶鑫,边维,陈治池,杜娟娟,傅维达,陈梦娇,李俊楠,孙臣友

单位：1.温州医科大学基础医学院人体解剖学教研室，浙江 温州325035; 2.台州职业技术学院医学与制药工程学院护理教研室，浙江 台州318000; 3.温州医科大学基础医学院神经科学研究所，浙江 温州325035;4.温州医科大学基础医学院组织学胚胎学教研室，浙江 温州325035; 5.温州医科大学第一临床医学院2015、2016级临床医学、医学影像学本科，浙江 温州325035

关键词：别孕烯醇酮, γ-氨基丁酸A受体, 多巴胺能神经元, 钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ, 脑源性神经营养因子, 免疫印迹法

基金：别孕烯醇酮促进PD小鼠多巴胺能神经元新生的作用及机制研究;CD133追踪APα诱导的6-OHDA PD小鼠新生多巴胺能神经元起源的应用研究

目的： 明确别孕烯醇酮（APα）对6-羟多巴胺（6-OHDA）损伤的SH-SY5Y细胞系的保护作用，并阐明可能的分子机制。方法： 向体外培养的SH-SY5Y细胞系中分别加入6-OHDA、APα、γ-氨基丁酸A受体（GABAAR）拮抗剂荷包牡丹碱（Bic）和电压门控L型Ca2+通道拮抗剂硝苯地平（nifedipine），采用免疫荧光细胞化学染色方法观察不同组别酪氨酸羟化酶（TH）阳性细胞的变化，Western blotting检测胞质钙调蛋白（CaM）、钙离子钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ δ3（CaMKⅡδ3），胞核CaMKⅡδ3、脑源性神经营养因子（BDNF）和细胞周期蛋白依赖性激酶（CDK1）表达的变化，采用蛋白质免疫共沉淀验证CaMKⅡδ3与CDK1/BDNF的相互作用。： 结果： APα作用后，6-OHDA损伤的SH-SY5Y细胞TH和5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）阳性细胞数目均明显增加，而TH/BrdU双阳性细胞数目无显著变化；同时Western blotting结果表明，SH-SY5Y细胞胞质和胞核上述蛋白的表达与单纯 6-OHDA 组相比也明显上升，经Bic处理后各蛋白增加更为明显。免疫共沉淀结果表明，CaMKⅡδ3与CDK1/BDNF存在相互作用。： 结论： APα对6-OHDA损伤的SH-SY5Y细胞的保护中，GABAAR发挥负性调控作用，通过稳定细胞的内环境达到增加TH阳性神经元数量的目的，其中Ca2+ -CaM-CaMKⅡδ3信号通路和BDNF与CDK1发挥了关键作用。

来源：2021年第1期

《解剖学报》期刊编辑部

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