解剖学报

作者：邓方芳,耿珊,姜蓉,汪子铃,肖含先之,齐嵘嘉,黄彩虹,曾娣,李赓,王璐,王亚平

单位：重庆医科大学干细胞与组织工程研究室，组织学与胚胎学教研室， 重庆400016

关键词：当归多糖, 人白血病干细胞, 增殖抑制, 体内移植, 细胞衰老, 流式细胞术, 小鼠

基金：当归多糖调控血液干细胞衰老的机理研究;当归多糖调控Keap1-Nrf2-ARE抗氧化通路延缓造血干细胞衰老的机制研究

目的： 探讨当归多糖(ASP)对人白血病干细胞(LSCs)增殖及体内移植的影响。： 方法1. ASP对CD34+CD38-人LSCs体外增殖的影响。免疫磁性法分选正常人和髓系白血病患者骨髓中CD34+CD38-细胞，分为正常CD34+CD38-对照组、CD34+CD38-LSCs对照组、正常CD34+CD38-ASP组和CD34+CD38-LSCs ASP组，后两组在常规培养基础上加入ASP（终浓度40 mg/L）。流式细胞术检测CD34+CD38- 细胞纯度；锥虫蓝染色检测细胞存活率；细胞计数试剂盒8（CCK-8）和混合集落形成单位（CFU-Mix）检测CD34+CD38-LSCs增殖分化能力；RT-PCR 检测衰老相关基因表达水平。2. ASP对人LSCs移植小鼠模型的影响。体内移植LSCs建立CD34+CD38- LSCs小鼠移植模型，随机分为ASP移植模型组［腹腔注射ASP，200 mg/kg，（1次/d）×14 d］和移植模型组（注射等时、等量生理盐水）。药物注射完成第2天，计数白细胞总数和分类计数，观察血细胞形态；免疫荧光细胞化学法检测受体鼠骨髓中CD34+CD38-LSCs；衰老相关β-半乳糖苷酶（SA-β-Gal）染色检测染色阳性骨髓单核细胞（BMMCs）百分率；流式细胞术检测BMMCs细胞周期分布；CFU-Mix培养检测BMMCs集落形成能力。： 结果： 分选后CD34+CD38-细胞纯度达到（91.14±1.02）%，细胞存活率为（95.42±3.5）%；CD34+CD38-LSCs对照组细胞增殖与集落形成能力显著高于正常CD34+CD38-对照组；CD34+CD38-LSCs ASP组细胞增殖能力与集落形成能力明显低于CD34+CD38- LSCs对照组；CD34+CD38-LSCs ASP组细胞高表达p16INK4a、p19Arf、p53、p21Cip1/Waf1基因。移植CD34+CD38-LSCs后小鼠骨髓中存在人源性LSCs。移植模型组小鼠白细胞总数增加，中性粒细胞比例升高，淋巴细胞比例降低；注射ASP可明显降低白细胞总数和中性粒细胞比例，淋巴细胞比例有所升高；处于G0/G1期中的BMMCs数量增加，S期细胞数量减少；SA-β-Gal染色阳性细胞百分率明显提高；CFU-Mix集落形成数显著减少。： 结论ASP在体内与体外均能抑制CD34+CD38-LSCs增殖，推测其可能机制与ASP调节细胞衰老相关基因表达密切相关。

来源：2021年第1期

《解剖学报》期刊编辑部

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