解剖学报

作者：曲明娟,李延敏,谢静,秦苗苗,王静,周菊华

单位：鲁东大学生命科学学院，山东 烟台 264025

关键词：规律间隔成簇短回文重复序列/相关蛋白9, 鸟苷酸解离抑制因子α, 向导RNA, PX458质粒, 肝癌细胞系Hepa 1-6, 反转录聚合酶链反应, 小鼠

基金：国家自然科学基金项目;鲁东大学科技项目

目的 利用规律间隔成簇短回文重复序列/相关蛋白9（CRISPR/Cas9）技术构建Rho鸟苷酸解离抑制因子α（GDIα）的基因敲除载体，并探讨干扰Rho GDIα后对小鼠肝癌细胞Hepa 1-6迁移的影响。： 方法： 根据CRISPR/Cas9靶点设计原则，设计Rho GDIα的向导RNA（sgRNA）序列，并与PX458载体相连，构建Rho GDIα基因敲除重组质粒PX458-Rho GDIα-sgRNA1和PX458-Rho GDIα-sgRNA2；脂质体转染法将重组质粒转染入Hepa 1-6细胞抑制Rho GDIα的基因表达；RT-PCR法检测Rho GDIα被抑制后的mRNA表达情况；划痕法检测Rho GDIα干扰后Hepa 1-6细胞迁移距离的差异；迁移小室法检测抑制Rho GDIα后Hepa 1-6细胞迁移数量的差异。： 结果： 成功构建了Rho GDIα的CRISPR/Cas9基因敲除质粒PX458-Rho GDIα-sgRNAs；转染有PX458-Rho GDIα-sgRNA1的Hepa 1-6 细胞与对照组只转染空载体PX458的细胞相比，Rho GDIα的表达被明显抑制（P<0.05），而且该组细胞从划痕起始处迁移到空白处距离较远，从迁移小室上端迁移到底端数目明显增多，差异极其显著（P<0.01），说明Rho GDIα被抑制后肝癌细胞的迁移能力提高。： 结论： CRISPR/Cas9法构建的重组质粒PX458-Rho GDIα-sgRNA1可以有效抑制Rho GDIα的基因表达；Rho GDIα被抑制后明显促进小鼠肝癌细胞Hepa 1-6的迁移，提示在体情况下，Rho GDIα的表达可能起到抑制细胞迁移的重要作用，在肿瘤组织中，可以利用过表达Rho GDIα来抑制肿瘤细胞的转移。

来源：2021年第1期

《解剖学报》期刊编辑部

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