解剖学报

作者：吴奇,王顺和,程霄,向玥,陈粼波,汪子玲,肖含先之,姜蓉,王璐,王亚平

单位：1.重庆医科大学干细胞与组织工程研究室，组织学与胚胎学教研室; 2.病理学教研室，重庆 400016；

关键词：D-半乳糖, 神经干细胞, 衰老, 细胞核相关因子2/抗氧化反应原件信号通路, 实时定量聚合酶链反应, 小鼠

基金：国家自然科学基金

目的 建立D-半乳糖（D-gal）诱导小鼠神经干细胞（NSCs）体外衰老模型，探讨NSCs衰老与细胞核因子E2相关因子2（Nrf2）/抗氧化反应元件（ARE）信号通路的关系。：：方法 取新生C57BL/6J小鼠全脑，分离、鉴定NSCs，培养至第3代，随机分为对照组和衰老组。对照组细胞在NSCs培养基中常规培养48 h，衰老组细胞在对照组基础上加入D-gal（终浓度为10 g/L）。细胞计数试剂盒8（CCK-8）法检测NSCs增殖活力；衰老相关β-半乳糖苷酶（SA-β-gal）染色检测衰老阳性神经球百分率；锥虫蓝染色检测细胞存活率；酶标比色法检测细胞培养上清液中超氧化物歧化酶（SOD）与过氧化氢酶（CAT）活性和丙二醛（MDA）含量；Western boltting检测NSCs中Nrf2和血红素加氧酶 1（HO-1）蛋白表达水平；Real-time PCR检测GCLC和GCLM基因表达水平。：：结果 与对照组相比，衰老组NSCs增殖活力明显下降，锥虫蓝染色显示，NSCs存活率下降明显，S-β-gal染色阳性神经球百分率显著上升，SOD活性与CAT活性均显著降低，MDA含量显著升高，NSCs中Nrf2/ARE信号通路相关蛋白Nrf2和HO-1表达水平显著下调，通路相关GCLC和GCLM基因表达下调。：：结论 采用D-gal可以构建NSCs体外衰老模型，其氧化损伤机制可能与抑制Nrf2/ARE抗氧化信号通路有关。

来源：2020年第6期

《解剖学报》期刊编辑部

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