解剖学报

作者：常玉巧,贾阳阳,韩贝,郭志坤

单位：新乡医学院河南省医用组织再生重点实验室，河南 新乡 453003；

关键词：5-氮杂胞苷, 心脏成纤维细胞, 心肌样细胞, 基因表达, 实时定量聚合酶链反应, 大鼠

基金：心肌成纤维细胞干细胞样特性及心肌分化的分子机制研究;新乡医学院博士科研基金资助项目

目的 探讨5-氮杂胞苷（5-aza）诱导心脏成纤维细胞（CFs）向心肌样细胞分化5 d、7 d、14 d、21 d和28 d相关基因的表达差异。：：方法 新生1～3 d SD大鼠12只，胰蛋白酶/胶原酶联合消化法分离培养新生大鼠CFs，采用CFs分子标记盘状结构域受体2（DDR2）并行细胞免疫荧光染色。含15 μmol/L 5-aza心肌细胞诱导液培养第3代CFs， Real-time PCR检测心肌化诱导不同时间点相关基因vimentin、DDR2、Nanog、sox2、c-kit、sca-1、Tbx5、CD73、CD34、cMyc、klf4、Gata4、Oct4、Mef2c和心肌肌钙蛋白T（cTnT）的表达差异，细胞免疫荧光检测心肌化诱导后5 d、7 d、14 d、21 d和28 d肌钙蛋白T（cTnT）的表达。透射电子显微镜观察心肌化诱导28 d CFs的超微结构变化。：：结果 5-aza诱导CFs后3 d 细胞生长速率减慢，部分细胞由三角形、梭形向圆形和杆状转变。诱导后7 d、14 d、21 d 和28 d，与诱导前相比，DDR2表达稳定，vimentin在14 d表达下降，Nanog、c-kit、sox2和Tbx5伴随着心肌化进程呈现表达下降趋势，而CD73、Mef2c、CD34、Gata4、Oct4和cTnT表达逐步增加，sca-1在7 d 表达上升又下降，cMyc和klf4在14 d表达上升又下降。诱导后 5 d少量细胞表达cTnT，14～21 d cTnT阳性细胞数明显增高，28 d表达cTnT较多且趋于稳定。透射电子显微镜显示，CFs心肌化诱导28 d，细胞与细胞间出现端-端连接，细胞质内出现大量的肌原纤维，排列较为规律，但肌节不明显，H带、Z线和M线显示不清。：：结论 CFs经5-aza诱导，可向心肌样细胞分化，但不能形成成熟的心肌细胞。

来源：2020年第6期

《解剖学报》期刊编辑部

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