解剖学报

作者：蔚洪恩,王敏,赵敏,石祥呈,李荣山

单位：山西医科大学附属人民医院/山西省人民医院1.神经内科; 2.病理科; 3.肾内科， 太原 030012；

关键词：成对框基因2, CRISPR/Cas9技术, 基因敲除, 肾脏发育障碍, 免疫印迹法, 小鼠

基金：国家自然科学基金面上项目;中国博士后科学基金面上资助项目;山西省青年拔尖人才支持计划;山西省应用基础研究项目

目的 利用成簇规律间隔短回文重复序列（CRISPR）/重组CRISPR相关核酸酶9（Cas9）技术双切口法制备成对框基因2（Pax2）敲除小鼠，为探讨Pax2基因在多个系统发育的作用提供动物模型。：：方法 根据Pax2基因序列设计sgRNA，设计出的sgRNA和Cas9体外转录后显微注射到C57BL/6J 小鼠的受精卵中，F0代小鼠出生后取其基因DNA测序鉴定基因型。共获得8只F0 代小鼠，使敲除成功的F0代小鼠与野生C57BL/6J 小鼠交配，获得F1代小鼠，后均采用基因成功敲除的小鼠与C57BL/6J 小鼠进行交配，可获得稳定的Pax2基因敲除小鼠。：：结果 成功获得可稳定繁殖的Pax2杂合子基因敲除小鼠，其Pax2基因缺失1628 bp；组织HE染色显示，敲除小鼠的肾小球数量明显减少；Western blotting结果显示，敲除小鼠的肾皮质Pax2蛋白表达较野生型小鼠减少。：：结论 利用CRISPR/Cas9技术可成功构建Pax2杂合子基因敲除小鼠，为进一步研究Pax2基因的作用奠定基础。

来源：2020年第4期

《解剖学报》期刊编辑部

查看解剖学报杂志2020年第4期