解剖学报

作者：张怡,靳晓飞,周晓红,董贤慧,张颖,于文涛,成媛,高维娟

单位：河北中医学院，河北省心脑血管病中医药防治研究重点实验室，石家庄 050091

关键词：Beclin1, 基因沉, 氧缺糖/复氧复糖, 自噬, 免疫印迹法

基金：国家自然科学基金面上项目;河北省研究生创新资助项目;河北省政府资助临床医学优秀人才培养和基础课题研究项目;河北省教育厅课题;河北省中医药管理局科研计划项目

目的 探讨beclin1基因对缺氧缺糖/复氧复糖小鼠海马神经元细胞系HT22细胞凋亡的影响。方法 取对数生长期的HT22细胞，随机分为4组：正常组（normal）、缺氧缺糖/复氧复糖（OGD/R）模型组（model）、beclin1基因沉默组（beclin1-/-）、转染对照组（control）。除normal组外，其余各组细胞均在缺氧缺糖6 h后进行复氧复糖。利用RNAi技术，针对小鼠cDNA序列设计beclin1干扰序列，用脂质体Lipo2000包裹后转染至HT22细胞。于转染48 h后用荧光显微镜观察转染效率，Western blotting检测细胞beclin1 表达情况。各组细胞均于复氧复糖24 h后采用CCK-8法检测细胞活力，乳酸脱氢酶（LDH）法检测细胞损伤情况，免疫荧光染色检测Bax、Bcl-2表达及比值变化，Western blotting检测LC3、P62及Caspase-3表达。SPSS 19.0 统计学软件进行数据分析。结果 与normal组相比，model组细胞活力及P62蛋白表达显著降低（P<0.01），乳酸脱氢酶（LDH）漏出率、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Caspase-3表达及Bax/Bcl-2均显著升高（P<0.01）。与model组相比，beclin1-/-组细胞活力及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ 表达显著降低（P<0.01），LDH漏出率、Bax/Bcl-2及P62、Caspase-3表达显著升高（P<0.01）；control组与model组比较差异无显著性。结论 沉默beclin1抑制细胞自噬可使缺氧缺糖/复氧复糖处理的HT22细胞损伤加重，细胞凋亡进一步增加。

来源：2020年第1期

《解剖学报》期刊编辑部

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