解剖学报

作者：丁玲,高杰,李红,胡蓉,苏敏

单位：1.贵州医科大学基础医学院组织学胚胎学教研室， 贵阳 550004; 2.贵州医科大学贵州省细胞工程生物医药技术国家地方联合工程实验室，贵州省再生医学重点实验室，贵阳 550004；

关键词：配对盒基因6, 小鼠胚胎干细胞, 基因转染, G418筛选, 流式细胞术, 小鼠

基金：贵州省科技厅基金;贵州省教育厅青年科技人才成长项目;贵州省普通高校科技拔尖人才支持计划

目的 建立配对盒基因6（Pax6）/小鼠胚胎干细胞（mESCs）细胞系并鉴定其干细胞生物学特性。 方法 体外培养mESCs，将重组载体pEF1α-Pax6-IRES-AcGFP和空载体pEF1α-IRES-AcGFP分别用脂质体法转染mESCs，经G418梯度及荧光蛋白双筛选后，使用细胞免疫荧光染色、免疫印迹法及RT-PCR技术检测Pax6的表达情况，流式细胞术检测Pax6/mESCs阳性细胞的比例。将获得正确的细胞系分别采用细胞免疫荧光染色对其干细胞标志物阶段特异性胚胎抗原1（SSEA1）、八聚体结合转录因子4（OCT4）进行检测，碱性磷酸酶（AP）染色法对其多能性进行检测，流式细胞术检测增殖指数Ki67。将Pax6/mESCs进行肾背囊下移植，移植物行HE染色观察其分化能力。 结果 Pax6成功在mESCs内表达，经G418筛选后，获得Pax6/mESCs细胞系，流式结果显示，Pax6阳性率为90%，免疫荧光显示，干细胞标志物SSEA1、OCT4表达阳性且AP染色阳性，并且在体内移植后能向3个胚层分化。 结论 Pax6成功在mESCs内表达，经G418筛选后，获得细胞系Pax6/mESCs并维持良好的干细胞特性。

来源：2019年第4期

《解剖学报》期刊编辑部

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