解剖学报

作者：代金,林旭,郭梦姚,张静,张文静,薛刚,吴靖芳

单位：河北北方学院组织学与胚胎学教研室，河北 张家口 075000；

关键词：三叶因子3, 细胞周期, 慢病毒转染, 磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B, 流式细胞术, 人

基金：河北省自然科学基金;张家口市科技支撑项目

目的 探讨三叶因子3 (TFF3)基因沉默对人甲状腺乳头状癌TPC-1和BCPAP细胞增殖及细胞周期的影响及相关分子机制。 方法 包装TFF3 shRNA 慢病毒载体，病毒感染获得TPC-1和BCPAP稳转细胞株；生长曲线和集落形成实验检测沉默TFF3后细胞增殖状况；流式细胞术检测TFF3基因对TPC-1和BCPAP细胞周期的影响；实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测P27、P21和cyclin D1、周期蛋白依赖性激酶（CDK）4 mRNA的表达情况；免疫印迹法(Western blotting)、免疫细胞化学染色检测周期相关蛋白P27、P21、cyclin D1、CDK4和蛋白激酶B（Akt）、pAkt的蛋白表达水平。 结果 成功包装TFF3 shRNA 慢病毒载体，病毒液感染获得TPC-1和BCPAP稳转细胞株；生长曲线和集落形成实验结果显示，沉默TFF3后，细胞增殖能力减弱；流式细胞术结果显示，与对照组相比，TFF3基因沉默组G1期的细胞比例明显增高(*P<0.05)，S和G2期的细胞比例明显下降（*P<0.05)；TFF3沉默组TPC-1和BCPAP细胞中的P27、P21 mRNA和蛋白明显上调（*P<0.05)，而cyclin D1，CDK4 mRNA和蛋白表达降低（*P<0.05)；4株细胞Akt蛋白含量无明显差异，但沉默TFF3组磷酸化蛋白激酶B（pAkt）表达减弱；免疫细胞化学染色显示,cyclinD1阳性蛋白位于癌细胞胞核，P27、P21蛋白表达于胞质和胞核，且沉默TFF3后在细胞核中阳性信号增强，细胞质中阳性表达降低。结论 沉默TFF3可明显延长甲状腺癌细胞周期，抑制细胞的增殖，可能与抑制磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）通路相关蛋白的表达有关。

来源：2019年第2期

《解剖学报》期刊编辑部

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