解剖学报

作者：李雪,张犇,牛淑冬,王玉阁,文丽波,梁晨,齐晓娟,李宇,雷蕾

单位：1.齐齐哈尔医学院生理学教研室，黑龙江 齐齐哈尔 161000; 2.齐齐哈尔市第一医院心内科，黑龙江 齐齐哈尔 161000; 3.齐齐哈尔医学院第三附属医院对外协作科，黑龙江 齐齐哈尔 161000;4.齐齐哈尔医学院机能实验学教研室，黑龙江 齐齐哈尔 161000; 5.哈尔滨医科大学组织学与胚胎学教研室，黑龙江 哈尔滨 150081；

关键词：胚胎成纤维细胞, 重编程, 诱导多能性细胞, 神经分化, 维甲酸, 免疫荧光, 猪

目的 探讨建立猪多能性细胞(iPPCs)的优化方案，并探求其向神经谱系细胞特异性分化的方法。 方法 利用经典的Yamanaka方法，联合应用组蛋白乙酰化酶抑制剂丙戊酸 (VPA)、甲基转移酶抑制剂5-氮-2’-脱氧胞苷(5-AZA)及Oct4病毒的重复感染，优化重编程方案，诱导巴马小型猪胚胎成纤维细胞为诱导的iPPCs。通过Real-time PCR检测重编程过程中多能性基因的分子表达。通过维甲酸 (RA) 及细胞外基质 (ECM) 的联合培养，诱导iPPCs向神经谱系细胞特异性分化，免疫荧光细胞化学方法检测神经特异性标记物表达。 结果 应用优化方案，将猪胚胎成纤维细胞重编程为iPPCs。 Real-time PCR显示，VPA和Oct4病毒的重复感染可显著促进重编程过程中多潜能基因的表达。5-AZA未显著提高多潜能基因的表达。RA及ECM的联合培养可诱导iPPCs向神经谱系细胞分化，并表达神经特异性标志基因神经元类型Ⅲ β-微管蛋白（Tuj1）和胶质纤维酸性蛋白（GFAP）。 结论 在利用优化方案建立猪多能性细胞的基础上，将其向神经谱系细胞特异性分化，对人类神经性疾病的细胞替代治疗具有重要意义。

来源：2019年第1期

《解剖学报》期刊编辑部

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